哪些因素会影响PGT-A检测的准确性?

PGT-A(植入前基因检测 - 非整倍体筛查)是辅助生殖技术中用于筛选染色体数目正常胚胎的重要手段，其检测准确性受多种因素影响。以下从样本、技术、操作及临床等维度展开分析：

一、样本相关因素

1. 胚胎活检质量

活检细胞数量：若活检获取的滋养层细胞过少(如 < 5 个)，可能因 DNA 量不足导致扩增失败或检测误差;

细胞代表性：滋养层细胞与内细胞团(未来发育成胎儿的部分)可能存在染色体嵌合现象(约 10%-15% 的胚胎)，若活检样本未包含异常细胞，会造成假阴性结果;

活检时机：囊胚期(第 5-6 天)活检比卵裂期(第 3 天)更准确，因卵裂期胚胎嵌合率更高(约 30%-40%)。

2. 样本污染与降解

操作污染：活检过程中若接触外源 DNA(如试剂、耗材污染)，可能干扰检测结果;

保存条件：样本未及时冷冻或运输过程中温度波动，可能导致 DNA 降解，影响测序质量。

二、检测技术局限性

1. 不同检测方法的精度差异

2. 嵌合型胚胎的检测挑战

当胚胎中正常细胞与异常细胞混合存在(嵌合率 10%-50%)时，PGT-A 可能因活检样本随机性漏检异常细胞，导致将嵌合胚胎误判为正常。

三、实验室操作误差

1. DNA 扩增偏差

单细胞全基因组扩增(WGA)技术可能产生等位基因脱扣(ADO)，即部分 DNA 片段未被扩增，导致假阴性或假阳性结果;

扩增过程中若出现污染(如引物二聚体、非特异性扩增)，会干扰数据分析。

2. 数据分析与解读误差

生信分析软件的算法差异(如阈值设定)可能导致结果判读偏差;

检测人员经验不足，可能漏判低比例嵌合或细微染色体异常(如微缺失 / 微重复)。

四、临床因素影响

1. 患者年龄与胚胎质量

高龄女性(>35 岁)胚胎非整倍体率升高(如 40 岁时达 60%-70%)，但 PGT-A 对高龄患者的筛查效益可能因胚胎数量少而降低;

优质囊胚(评分≥3BB)的活检准确性高于低评分胚胎，因后者嵌合率更高。

2. 检测时机与临床决策

若 PGT-A 在冷冻胚胎移植(FET)周期中进行，解冻复苏过程可能对胚胎造成额外损伤，与检测结果无关但影响妊娠结局;

临床医生若忽视 PGT-A 结果与胚胎发育潜能的综合评估(如仅依赖检测结果选择胚胎)，可能导致移植失败。

五、其他潜在因素

1. 母体因素

母体血液中的胎儿游离 DNA(cffDNA)若通过活检创口进入样本，可能干扰检测(尤其在多胎妊娠或胎盘异常时);

母体自身染色体异常(如平衡易位)可能导致胚胎染色体异常，但 PGT-A 仅筛查非整倍体，不检测结构异常。

2. 伦理与技术边界

PGT-A 无法检测单基因病(需结合 PGT-M)，也不能完全排除胚胎发育中的后期突变(如着床后染色体异常)。

提高准确性的建议

优化活检技术：选择囊胚期活检，获取足够数量的滋养层细胞(≥5-10 个)，减少嵌合影响;

联合检测方法：采用 NGS+aCGH 双重验证，或结合极体活检(针对母源染色体异常);

严格实验室质控：使用防污染耗材，规范 WGA 流程，采用自动化分析软件减少人为误差;

临床综合评估：结合胚胎评分、患者年龄及既往妊娠史，避免仅依赖 PGT-A 结果决策;

嵌合胚胎管理：对检测为嵌合的胚胎，可考虑二次活检或告知患者移植风险，由患者自主选择。

总结

PGT-A 的准确性受样本质量、技术局限、操作规范及临床背景等多重因素影响。尽管该技术可显著提高试管婴儿的妊娠率并降低流产风险(尤其对高龄或反复种植失败患者)，但其并非 100% 可靠。临床中需结合技术优势与局限性，通过多维度优化和医患充分沟通，最大化检测价值并降低误判风险。